ELISA試劑盒重點(diǎn)：?ELISA試驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配方

ELISA試驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為根底，ELISA試劑以及各種溶液如何裝備?上海晶抗技術(shù)教師將ELISA試驗(yàn)，各種ELISA裝備辦法匯總?cè)缦拢?/span>
(1)ELISA試驗(yàn)包被緩沖液
(2)ELISA試驗(yàn)洗刷緩沖液
(3)ELISA試驗(yàn)稀釋液;
(4)ELISA試驗(yàn)停止液
(5)ELISA底物緩沖液
(6)ELISA試驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)運(yùn)用液
(7)規(guī)范品稀釋液。
試劑配方：
a, ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2M Na2HPO4(28.4克/L)              25.7ml
0.1M 檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml
加蒸餾水50ml。
b, ELISA試驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)運(yùn)用液:
TMB(10mg/5ml無(wú)水乙醇)   0.5ml
底物緩沖液(PH5.5)   10ml
0.75%H2O2                           32μl
c,規(guī)范品稀釋液：
PBS 1L配方pH7.2-7.4.濃度0.01mol/L：
磷酸二氫鉀(KH2PO4)：0.27g，
磷酸氫二鈉(Na2HPO4)：1.42g，
氯化鈉(NaCl)：8g，
KCl 0.2g，
加去離子水約800mL充沛拌和溶解，然后參加濃鹽酸或許氫氧化鈉調(diào)pH至7.2-7.4，zui終定容到1L.濃度為10mmol/L
d,ELISA試驗(yàn)包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):
NaHCO3    1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸餾水至1000ml
e, ELISA試驗(yàn)洗刷緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M
KH2PO4   0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl   8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05%  0.5ml
加蒸餾水至1000ml
f, ELISA試驗(yàn)稀釋液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗刷緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗刷液配成5～10%運(yùn)用。
g, ELISA試驗(yàn)停止液(2M H2SO4)：
蒸餾水178.3ml，逐滴參加濃硫酸(98%)21.7ml。
h,ELISA試驗(yàn)封閉液：
牛血清白蛋白(BSA) 5克
加洗刷緩沖液至100ml。
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長(zhǎng)期保存。為了確保ELISA試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，試驗(yàn)操作中參加的緩沖液和各組分一定要準(zhǔn)確，將洗刷液參加酶標(biāo)板中的時(shí)分避免參加的試劑混入另外一個(gè)酶標(biāo)孔，謹(jǐn)防穿插污染。